热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)-RNAi技术-试剂-生物在线
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热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)

热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)

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产品名称: 热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)

英文名称: HotStart Taq DNA Polymerase

产品编号: HZ0036

产品价格: 0

产品产地: 中国/上海

品牌商标: 沪震生物

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

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 热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)

中文名称:热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)
英文名称:HotStart Taq DNA Polymerase
产品规格:100U|500U|3000U
本制品是Taq抗体和Taq DNA Polymerase(货号:SY0024)的混合产品。Taq抗体与Taq酶具有很高的亲和力,高温50℃处理30 min,依旧可以封闭Taq酶的活性。本品在预变性温度下加热30秒完全失活,释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。

本制品适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Taq DNA聚合酶是热稳定重组型DNA聚合酶,具有较高的模板亲和力,非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3-dA,可轻松克隆用于T载体。

产品组成:

组分 100U 500U
HotStart Taq DNA Polymerase(5U/μl) 20μl 100μl
HotStart Taq Buffer(含Mg2+、dNTP) 1ml 1ml×5


保存条件:-20℃保存,有效期2年。

活性定义:
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。

PCR反应体系(50μl):

组分 体积 终浓度
HotStart Taq Buffer(含Mg2+、dNTP) 25μl
模板DNA 适量 -
正向引物(10μM) 2μl 0.4μM
反向引物(10μM) 2μl 0.4μM
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 0.5μl 2.5U/50μl
ddH2O 补水至50μl -


注意:
1)试剂使用:各组分使用前需充分融化混匀。
2)聚合酶浓度:推荐使用2.5 U/50μL。可以在1.25-5 U/50μL之间进行优化。
3)Mg2+终浓度:体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可用25mM MgCl2,以0.2-0.5mM为间隔向上摸索。
4)不同模板的推荐使用量(50μL反应体系):

模板种类 模板使用量
基因组DNA 50ng-200ng
质粒DNA 100pg-20ng
cDNA 1-5μL(不超过反应体系的1/10)



PCR扩增程序:

循环步骤 温度 时间 循环数
预变性 95℃ 1 min 1
变性 95℃ 10 sec 35-40
退火 60℃ 20 sec
延伸 72℃ 30 sec/kb
终延伸 72℃ 10 min 1


注意:
1)退火温度和时间:温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为20sec,可以在10-30sec内调节。
2)延伸温度和时间:温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。
3)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止DNA发生降解。
4)扩增程序:本产品用于定量实验,可使用2步法程序扩增,去掉延伸步骤,退火和延伸合为一步,对应的时间常用30 sec或根据仪器型号设置,如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。 

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!