从单细胞起始的总RNA或mRNA全转录本扩增-产品资讯-资讯-生物在线

从单细胞起始的总RNA或mRNA全转录本扩增

作者：杭州联科生物技术股份有限公司 2014-10-03T23:31 (访问量:3741)

REPLI-g WTA Single Cell Kit能够在单细胞转录本水平上对转录调控的影响进行可靠的研究，并允许从单细胞（1–1000个细胞）进行所有转录物的均一扩增。专用的缓冲液和试剂经过了独特的、可控的净化步骤以防止REPLI-g技术扩增污染的核酸。创新的裂解液可以有效地稳定细胞RNA，以确保所得到的RNA准确地反映体内基因的表达图谱。所有的酶促步骤已经过专门改进，使得用于cDNA准确扩增的RNA得到高效处理。而扩增步骤则采用创新的多重置换扩增（MDA）技术，序列偏差可以忽略不计。

根据研究需要，QIAGEN针对从单细胞扩增cDNA或纯化RNA提供了不同的实验方案：

蛋白编码RNA的数量多
扩增富集mRNA的RNA (poly A+)的能力，使REPLI-g WTA Single Cell Kit特别适用于通过NGS研究单细胞转录本水平上的转录调控影响。产生超过90％的NGS片段的核糖体RNA（rRNA）扩增几乎完全被消除，可产生有意义的mRNA-Seq数据。

从单细胞扩增mRNA（poly A+）3'端区域：

只扩增带有poly A +尾巴的mRNA（和其他的RNA），适合于广泛的应用，包括NGS(RNA-Seq）、real-time PCR和微阵列分析。

从单细胞扩增总RNA：

可扩增完整的转录本，包括带有和不带有poly A +尾的RNA，lnc RNA和linc RNA。需要注意的是，rRNA也将扩增并且扩增程度很高。如果用序列特异性探针（例如用qPCR或阵列协同工作），扩增的rRNA并不会影响下游应用的结果。如果将扩增的RNA用于RNA-Seq，请注意超过90％的片段来自于rRNA，因此进行全转录本测序时必须获得充足的读段。

可靠检测低丰度转录本
单细胞分析的挑战性大，尤其是同一细胞内的转录本丰度差异很大时。为获得准确的结果，应确保全转录组扩增时可靠扩增所有转录本。REPLI-g WTA Single Cell Kit高度适合于但细胞中转录本分析，即便是低丰度转录本。对使用REPLI-g技术扩增的转录本abl-1进行real-time PCR分析，结果显示即便是低丰度转录本也能在使用该试剂盒扩增后，得以可靠的检测。

纯化RNA的扩增：